Tiparea biochimică și serologică a agenților patogeni ai infecțiilor toxice alimentare. Microbiologie serie pestriță Proprietăți biochimice ale salmonelei
Mediu de magneziu Rappaport-Vassiliadis, 500 g/pachet, Nr. Cat. 107700
- SalmonellaîmbogăţirebulionRAPPAPORT- Mediu de magneziu Rappaport, 500 g/pachet, Cat. Nr. 110236
- Bulion de îmbogățire cu tetrationat Muller-Kauffman- bulion tetrationat, 500 g/pachet, Cat. Nr. 110863
- Muller-
KauffmannTetrationat-
NovobiocinăBulion (MKTTn)
- bulion tetrationat cu novobiocin, 500 g/pachet, Cat. Nr. 105878
- BismutsulfitagarWILSON-
BLAIR- Agar bismut-sulfit, 500 g/pachet, Nr. Cat. 105418
- Hektoenentericagar- Agar hectoen, 500 g/pachet, Cat. Nr. 111681
- SS-
agar- Agar Salmonella-Shigella, 500 g/pachet, Cat. Nr. 107667
- BPLS (Sclipitor-
verdeFenol-
roșuLactozăZaharozaAgar)
- Agar lactoză zaharoză cu verde strălucitor și roșu fenol, 500 g/pachet, Nr. Cat. 107232
- XLD-agar- Agar xiloză-lizin-deoxicolat pentru izolarea și diferențierea enterobacteriilor patogene, 500 g/pachet, Cat. Nr. 105287
- Agar XLT4- Xiloză-lizină cu tergitol 4 (inhibă complet creșterea Proteus), 500 g/pachet, Cat. Nr. 113919
- Supliment XLT4- Aditiv selectiv pentru mediu de agar XLT4, 100 ml/pachet, Nr. Cat. 108981
- Agar Rambach- Agar Rambach cromogen pentru salmonella, 250 de definitii, 4 sticle x 250 ml, Cat. Nr. 107500
- MSRV (Rappaport-Vassiliadis semisolid modificat)- Mediu semi-lichid pentru izolarea accelerată a salmonelei din produse și materii prime, 500 g/pachet, Cat. Nr. 109878
- Supliment selectiv MSRV- Aditiv selectiv (novobiocină, 10 mg) pentru mediul MSRV, 10 sticle/pachet, Cat. Nr. 109874
- Baza de bulion Salmosyst- Îmbogățire neselectivă, 500 g/pachet, Nr. Cat. 110153
- Salmosyst comprimate selective- Îmbogățirea selectivă a Salmonella - mediu tetrationat în tablete, 250 comprimate/pachet, Cat. Nr. 110141
- Agar KLIGLER- Agar Kligler, 500 g/l, Cat. Nr. 103913
- Agar cu trei zahăr și fier- Agar cu trei zaharuri cu fier, 500 g/pachet, Cat. Nr. 103915
- Agar lizină cu fier- Agar lizină cu fier pentru diferențierea și identificarea enterobacteriilor; determinarea lizin decarboxilazei și hidrogen sulfurat, 500 g/pachet, Cat. Nr. 111640
- Agar citrat SIMMONS- Simmons Citrat Agar pentru identificare, 500 g/l, Cat. Nr. 102501
- Salmonella cu cale unică- Test expres (20 min) pentru salmonella, 25 teste/pachet, Cat. Nr. 104140
Salmonellaspp.)
Genul Salmonella aparține familiei Enterobacteriaceae. Bacteriile sunt în formă de bastonaș, gram-negative, asporogene, predominant mobile. La nivel global, Salmonella este unul dintre cei mai comuni agenți patogeni de origine alimentară, infectând majoritatea tipurilor de alimente crude (de exemplu, carne, ouă, produse vegetale). Rezistența bacteriilor la uscare, împreună cu rezistența lor ridicată la căldură, reprezintă o problemă în protejarea majorității alimentelor uscate și semi-uscate de agentul patogen. Conform legislației alimentare a majorității țărilor, salmonella nu este permisă în 25 g de produs alimentar. Pentru a obține un răspuns simplu (da/nu) cu privire la prezența salmonelei în alimente și furaje folosind metode microbiologice tradiționale, trebuie cheltuite în total până la 5 zile. Pentru produsele care trebuie vândute rapid, aceasta înseamnă o întârziere semnificativă. Pentru a îndeplini cerințele producătorilor de alimente pentru vânzarea rapidă a produselor finite și pentru a reduce costurile de depozitare, este necesar să se utilizeze metode inovatoare, accelerate pentru detectarea salmonelei. Astfel, metodele accelerate de analiză a Salmonelei prezintă un interes din ce în ce mai mare. Testele rapide oferite în aceste scopuri trebuie să fie specifice, sensibile, convenabile și rentabile. În funcție de numărul de probe studiate și de cerințele pentru specificul metodei, alegerea poate fi făcută fie în favoarea analizei moleculare a ADN-ului bacterian prin PCR (de obicei pentru un laborator de mare capacitate), fie în favoarea testelor de imunodiagnostic (când analizând un număr mai mic de probe).
Salmoneloza
Majoritatea persoanelor infectate cu Salmonella dezvoltă diaree, febră și dureri abdominale la 12 până la 72 de ore după infectare. Boala durează de obicei 4-7 zile, iar majoritatea pacienților se recuperează fără tratament. Cu toate acestea, în unele cazuri, boala poate fi atât de gravă încât este necesară spitalizarea. La astfel de pacienți, infecția cu Salmonella se poate răspândi din intestine în sânge și în alte părți ale corpului. Dacă pacientul nu este tratat cu antibiotice în timp util, acest lucru poate duce la deces. Adulții mai în vârstă, sugarii și cei cu sistemul imunitar compromis vor fi afectați mai întâi de cea mai severă formă a bolii.
Patogenitate
Salmonella este unul dintre cei mai periculoși agenți patogeni ai infecțiilor intestinale la oameni și animalele de fermă. Potrivit OMS, în lume se înregistrează anual până la 1,3 miliarde de cazuri de salmoneloză, în timp ce dinamica bolii în populație tinde să crească. Cu absenta tratament eficient cazurile fatale la om variază de la 1-3 la 10-15%. În fiecare an, în Statele Unite, boala este înregistrată la 1,4 milioane de oameni, iar costurile materiale asociate cu consecințele și prevenirea bolii sunt estimate la 1-2,3 miliarde de dolari.În Rusia, această boală ocupă locul al doilea în structura intestinului acut. infectii.
Taxonomie
Gen Salmonella, numărând peste 2.500 de serovari (serotipuri), face parte din familia Enterobacteriaceae (enterobacterii). Conform clasificării moderne bazate pe analiza ADN-ului, genul Salmonella include specia patogenă S. enterica pentru oameni și animale cu sânge cald. Această specie este împărțită în 6 subspecii. Subspecia S. enterica subsp. Enteritidis este un agent cauzator al bolilor transmise prin alimente. Subspecia S. enterica subsp. Typhi, S. enterica subsp. Paratifii A, B sunt agenții cauzatori ai febrei tifoide, paratifoidei A și B la om.
Morfologie
Celulele de Salmonella sunt mobile (mulțumită flagelilor), asporogene, baghete drepte gram-negative (0,5-1x1-3 µm) cu capete rotunjite. Există, de asemenea, indivizi nemobili și tulpini. Nu formează o capsulă; sunt chimiorganotrofe anaerobe facultative cu metabolism oxidativ și fermentativ. Ele cresc bine pe medii nutritive simple și care conțin bilă. Pe medii solide pot forma colonii în formă R (aspre) și în formă S (netede); pe medii lichide dau turbiditate difuză. Coloniile în formă de S au dimensiuni medii, strălucitoare, translucide, cu o nuanță albăstruie. La inocularea sângelui, cel mai bun mediu lichid de îmbogățire este bulionul de bilă; la inocularea biomaterialelor (fecale, bilă, urină) care conțin floră suplimentară, bulion selenit. Pe medii diferențiale care conțin lactoză, bacteriile formează colonii incolore, pe agar bismut-sulfit - colonii negre.
 |
Caracteristici biochimice
Salmonella are activitate biochimică pronunțată caracteristică genului. Pentru a le identifica, este important să țineți cont de următoarele proprietăți biochimice:
1) fermentația glucozei și a altor carbohidrați (manitol, maltoză) la acid și gaz (subspecie) Sf.yphi eliberează numai acid)
2) absența fermentației lactozei, zaharozei, salicinei și ureei,
3) reacționează cu putregaiul de metil, produce hidrogen sulfurat, nu formează indol (de regulă) - oxidaza este negativă, catalaza este pozitivă, reacția Voges-Proskauer este negativă,
4) temperatura optimă pentru creștere este de 35-37 o C, creșterea se oprește complet la 5 o C; pH optim=7,2-7,4.
Conform clasificării serologice, marea majoritate a serotipurilor (serotipurilor) de Salmonella patogene pentru om aparțin grupelor A, B, C, D și E. Salmonella sunt tastate folosind reacția de aglutinare Kauffman-White. Pentru producerea acestuia se folosesc seruri hiperimune sau anticorpi monoclonali la Salmonella. Diagnosticul salmonelozei și analiza epidemiologică a agenților patogeni se bazează pe serotipizare.
Surse și factori de transmitere a infecției
Salmoneloza (febra tifoidă, febra paratifoidă, gastroenterita, septicemia etc.) sunt boli larg răspândite la animale și la oameni cu un mecanism de transmitere fecal-oral. La oameni, infecțiile toxice transmise prin alimente sunt însoțite de daune tract gastrointestinalși deshidratarea organismului. Doza infectantă este de la 1000 la 10 mii de celule. Habitatul permanent este intestinele oamenilor și ale animalelor cu sânge cald, care sunt un rezervor de infecție. Produsele alimentare și materiile prime contaminate, precum și apa, sunt principalele surse și factori de transmitere a agentului patogen. Agentul patogen intră în produsele alimentare din materii prime contaminate. Solul este implicat în calea de contact de transmitere a infecției. Prezența salmonelei în sol sau apă indică întotdeauna contaminarea acestor medii cu fecale ale oamenilor și/sau animalelor infectate - păsări, vite, porci, pisici, câini, porumbei. Infecția lor cu salmonella variază de la 6-7 la 80%.
Principalele surse de infecție
În Statele Unite, salmoneloza reprezintă aproximativ 9% din infecțiile de origine alimentară, iar o parte semnificativă a populației acestei țări este purtătorii ei de bacterii asimptomatice. Produsele de pasare contaminate, carnea si produsele din carne, laptele, branza, untul, legumele si fructele, semifabricatele si condimentele (maioneza, praf de ou, creme etc.) sunt principalele surse de salmoneloza. Produsele alimentare sunt, de asemenea, contaminate cu bacterii în timpul gătitului, contactului cu purtători, echipamente de producție și purtători de animale (muște, rozătoare asemănătoare șoarecilor, animale de companie). Durata viabilității Salmonella depinde de tipul de produs și de condițiile de mediu. Astfel, bacteriile supraviețuiesc la suprafața legumelor și fructelor timp de 5-10 zile, în lapte - până la 20 de zile, în bere și chefir - până la 2 luni, în cârnați, carne (inclusiv sărată), unt- de la 2 la 6 luni, in branzeturi - pana la 1 an, in carne congelata - pana la 2-3 ani.
Patogeneza
Natura diferită a bolii se explică prin multiplicitatea factorilor de patogenitate (endo-, exotoxine etc.), care nu au fost încă suficient studiati. Toate Salmonella virulente produc endotoxină, care induce dezvoltarea febrei la persoanele infectate (cu creșterea temperaturii la 39-40 o). După infecția orală, odată ajunsă în intestinul subțire, salmonella invadează mucoasa intestinală și, înmulțindu-se în macrofage, formează focarul primar al infecției. La sfârșitul perioadei de incubație (10-14 zile după infectare), Salmonella intră în sânge și provoacă bacteriemie. Agenții cauzali ai febrei tifoide și paratifoide s-au răspândit în tot corpul prin fluxul sanguin, instalându-se în celulele ficatului, splinei, plămânilor, măduvă osoasă, precum și vezica biliară. Până la sfârșitul celei de-a doua săptămâni de la debutul bolii, agentul patogen este eliberat din corpul pacientului în urină, fecale, lapte matern și salivă. Nu se formează imunitatea la boală.
Metode de detectare
Un rol important îl joacă prevenirea specifică a salmonelozei, care constă în realizarea măsurilor veterinare, sanitare, sanitare și igienice și antiepidemice. Prevenirea este însoțită de controlul permanent al agentului patogen din alimente, furaje, materii prime și apă.
Metoda clasică
Medii pentru izolarea Salmonella
- Apa cu peptonă tamponată
- Mediul Rappaport-Vassiliadis
- Mediu cu selenită
- bulion tetrationat
- Agar xiloză-lizină-deoxicolat
- Agar diamant verde
- Agar sulfit de bismut
Metodă clasică de studiere a salmonelei folosind medii nutritive. Cu toate acestea, din cauza lungimii procedurii de analiză, o metodă clasică nu este suficientă pentru a determina agentul patogen.
expres imunocromatograficteste
Pentru a accelera detectarea salmonelei, a reduce semnificativ costurile cu forța de muncă și a economisi resurse, în ultimele decenii au fost dezvoltate, testate și utilizate pe scară largă metode accelerate de identificare a agentului patogen. Metodele accelerate pot reduce semnificativ (cu 24-48 de ore) durata cercetării. Dispunând de o sensibilitate ridicată, acestea asigură detectarea fiabilă a Salmonelei în materialul analizat.
Documente normative
- MP 24 FC 976 Metode de identificare a microorganismelor patogene folosind teste rapide imunocromatografice produse de Merck (Germania)
- GOST R 50455-92. Carne și produse din carne. Detectarea Salmonella (metoda de arbitrare)
- GOST R 52814-2007 (ISO 6579:2002). Produse alimentare. Metodă de identificare a bacteriilor din genul Salmonella.
- GOST R 53665-2009. Carne de pasăre, organe și produse semifabricate din carne de pasăre. Metoda de detectare a Salmonella;
- SP 3.1.7.2616-10. Reguli sanitare și epidemiologice. Prevenirea salmonelozei. M.: Rospotrebnadzor. 2010.18 str.
Manualul este format din șapte părți. Partea întâi – „Microbiologie generală” – conține informații despre morfologia și fiziologia bacteriilor. Partea a doua este dedicată geneticii bacteriilor. Partea a treia – „Microflora biosferei” – examinează microflora mediu inconjurator, rolul său în ciclul substanțelor din natură, precum și microflora umană și semnificația acesteia. Partea a patra – „Studiul infecției” – este dedicată proprietăților patogene ale microorganismelor, rolului lor în procesul infecțios și conține, de asemenea, informații despre antibiotice și mecanismele lor de acțiune. Partea a cincea – „Doctrina imunității” – conține idei moderne despre imunitate. A șasea parte – „Virușii și bolile pe care le provoacă” – oferă informații despre proprietățile biologice de bază ale virușilor și despre bolile pe care le provoacă. Partea a șaptea - „Microbiologie medicală privată” - conține informații despre morfologia, fiziologia, proprietățile patogene ale agenților patogeni ai multor boli infecțioase, precum și metode moderne diagnosticul, prevenirea și terapia specifică a acestora.
Manualul este destinat studenților, absolvenților și profesorilor de medicină superioară institutii de invatamant, universități, microbiologi de toate specialitățile și medici practicanți.
Ediția a V-a, revizuită și extinsă
Prevenirea specifică nu este utilizat, deși au fost propuse diferite vaccinuri din tulpini ucise și vii (mutante). S. typhimurium.
Acest gen din familia Enterobacteriaceae include peste 2.000 de bacterii diferite care cauzează boli la oameni și animale. Aceste boli se numesc salmoneloză. Salmonella este similară ca proprietăți morfologice, culturale și enzimatice, dar diferă în structura antigenică.
Salmonella este împărțită în monopatogene și polipatogene. Primii includ agenții patogeni ai febrei tifoide, paratifoid A și paratifoid B. Doar oamenii suferă de aceste boli. Al doilea grup include agenți patogeni care infectează oamenii și animalele.
S. typhi a fost descoperit pentru prima dată de Ebert (1880) în organele unei persoane care a murit de febră tifoidă. Ashar și Bansod (1886), în boli similare febrei tifoide, au izolat bacterii din puroi și urină ale pacienților care diferă ca proprietăți biochimice și serologice de agenții cauzali ai febrei tifoide. Au fost denumiți S. paratyphi A și S. paratyphi B. Aproape simultan, omul de știință american D. Salmon (1885) a descris pentru prima dată agenții cauzatori ai holerei porcine (S.choleraesuis). Ulterior, au fost descrise multe bacterii asemănătoare, unite în genul Salmonella, numit după omul de știință care le-a descris.
Morfologie. Toate Salmonella sunt mici, tije de 1,0-3,0 × 0,6-0,8 µm cu capete rotunjite. Gram negativ. Motil, peritric. Nu formează spori sau capsule.
Cultivare. Salmonella sunt anaerobe facultative. Nu sunt pretențioși cu mediile nutritive. Ele cresc bine pe MPA și MPB la 37°C (de la 20 la 40°C) și la pH 7,2-7,4 (de la 5,0 la 8,0). Pe MPA formează colonii delicate, translucide, ușor convexe, strălucitoare; pe MPB formează turbiditate uniformă.
În timpul culturii inițiale a materialului de la pacienți (fecale, urină, vărsături, sânge, bilă), se observă adesea o creștere lentă a Salmonella. Pentru a le acumula, se inoculează pe medii de îmbogățire: bulion selenit, mediu Müller, mediu Kaufman. Se mai folosesc medii elective (selective): bilă (10-20%) și mediu Rappoport.
Pe mediile de diagnostic diferențial Endo, EMS, Ploskirev, salmonella cresc sub formă de colonii incolore, deoarece nu descompun lactoza inclusă în mediu. Pe agar bismut-sulfit după 48 de ore formează colonii negre care lasă urme după ce sunt îndepărtate cu o ansă (cu excepția Salmonella paratifoid A).
În culturile proaspăt izolate de S. paratyphi B, după incubarea în termostat timp de 18-20 ore și păstrarea la temperatura camerei timp de 1-2 zile, se formează un diaft mucos la periferia coloniei.
Proprietăți enzimatice. Salmonella descompune glucoza, manitolul și maltoza pentru a forma acid și gaz. O excepție este agentul cauzator al febrei tifoide (S. typhi), care descompune aceste zaharuri doar în acid. Salmonella nu fermentează lactoza și zaharoza. Proprietăți proteolitice: majoritatea salmonelelor descompun mediile proteice cu formarea de hidrogen sulfurat (agenții cauzatori ai paratifoidului A se disting prin absența acestei proprietăți). Indolul nu se formează. Gelatina nu este lichefiată.
Toxigenitate. Salmonella conține endotoxină - un complex lipopolizaharid-protein.
Structura și clasificarea antigenică. La începutul secolului al XX-lea, oamenii de știință au observat natura diferită a antigenelor Salmonella. Kaufman (1934), pe baza rezultatelor unei reacții de aglutinare a diferitelor Salmonele cu un set de seruri, a împărțit toate Salmonella în grupuri și tipuri și a propus o schemă de diagnostic pentru structura lor antigenică. În conformitate cu această schemă, în prezent sunt identificate Salmonella.
Salmonella conține două complexe antigenice: O și H, O-antigen - complex lipopolizaharid-proteină; este stabilă la căldură și inactivată de formaldehidă. Antigenul H este asociat cu flageli și este de natură proteică; este termolabil, inactivat de alcool si fenol, dar rezistent la formaldehida.
Toate Salmonella sunt împărțite în grupe O, fiecare dintre acestea fiind caracterizată de prezența anumitor antigene O: principalul, indicat printr-o cifră arabă (2, 4, 7, 8, 9 etc.) și altele suplimentare. , comună mai multor grupări O ( 1, 12). În prezent, sunt cunoscute peste 60 de grupuri O, desemnate cu majuscule ale alfabetului latin (A, B, C, D, E etc.).
S. typhi conține și un antigen Vi, care este localizat mai superficial în celula microbiană decât antigenul O și previne aglutinarea culturii cu ser O. Acest antigen este labil la căldură. Prezența sa a fost asociată cu virulența agentului patogen. Antigenul Vi este de asemenea conținut în celulele C S. paratyphi.
Antigenele Salmonella H au două faze. Salmonella din diferite serovari ale aceluiași grup O are o primă fază diferită a antigenului H, care este desemnată cu litere mici ale alfabetului latin: a, b, c, d, eh ... u, z etc. A doua fază a antigenului H este de obicei desemnată prin numere cu litere arabe: 1, 2, 5, 6, 7 și litere latine mici. Combinația diferitelor antigene O și H determină structura antigenică a culturilor și numele acestora.
În lucrările practice, pentru a determina structura antigenică a Salmonella, se folosesc seruri aglutinante monoreceptoare adsorbite, care conțin anticorpi la un antigen. Pe sticlă se realizează o reacție de aglutinare și, pe baza prezenței aglutinarii cu anumite seruri, se caracterizează structura antigenică a culturii izolate. De exemplu, o cultură este aglutinată de O-serurile „9” și „12” și H-serurile „d”; găsiți un serovar cu aceeași compoziție antigenică (S. typhi) în schemă, efectuați o reacție suplimentară cu Vi-ser
Există seturi de fagi specifici Salmonella care lizează numai Salmonella fagului corespunzător. Pentru determinarea produsului fagic al culturilor de S. typhi care conțin antigenul Vi, în țara noastră se produc 45 de fagi; pentru fagii S. paratyphi B-11; S. paratyphi A - 6 etc. Aceste studii sunt efectuate pentru a determina sursa și căile de transmitere a infecției.
Rezistenta la factorii de mediu. Salmonella este destul de rezistentă. La o temperatură de 100° C mor instantaneu, la 60-70° C - în 10-15 minute. Tolerează bine temperaturile scăzute și pot fi păstrate în apă curată și gheață timp de câteva luni; in carne afumata si sarata - pana la 2 luni. Rezistent la uscare, de lunga durata in praf.
Sub influența dezinfectanților mor în câteva minute (soluție de fenol 2-5%, soluție de mercur 1:1000, soluție de cloramină 3-10%).
Susceptibilitatea animalelor. Majoritatea Salmonella provoacă boli la oameni și la multe specii de animale și păsări (polipatogene).
Febra tifoidă, paratifoidă A și B
Sursa de infectie. O persoană bolnavă și un purtător de bacterii.
Căile de transmisie. Agenții infecțioși se transmit prin obiecte contaminate cu secreții umane, prin mâini, apă și alimente. Agenții patogeni sunt adesea transportați de muște. În funcție de calea de transmitere, focarele de febră tifoidă și febra paratifoidă se disting între focarele casnice, de apă și cele alimentare.
Patogeneza. Infecția are loc prin gură. Din cavitatea bucală, microorganismele pătrund în stomac, unde sunt parțial distruse sub influența sucului gastric și a enzimelor. Salmonelele rămase pătrund în intestinul subțire, pătrund în țesutul limfoid al intestinului subțire (grup de foliculi limfatici și solitari), în care se înmulțesc în perioada de incubație (10-14 zile). Până la sfârșitul acestei perioade, agenții patogeni intră în limfă și sânge (bacteremia) și se răspândesc în tot organismul. În această perioadă, ele sunt localizate în țesutul limfoid al organelor interne, sistemul macrofagelor, ficat, splină și măduva osoasă. Salmonella se acumulează în vezica biliară, unde găsește condiții favorabile pentru reproducere, deoarece bila este un bun teren de reproducere pentru aceste bacterii. În același timp, ele pătrund pentru a doua oară în intestinul subțire și, afectând țesutul limfoid deja sensibilizat (foliculi limfatici de grup și solitari), determină formarea de ulcere tifoide specifice (Fig. 42).
În perioada de bacteriemie, unele microorganisme sunt distruse, aceasta eliberează endotoxine și apar fenomene de intoxicație: apar temperatura, stare generală de rău, slăbiciune, cefalee etc.. De la sfârșitul săptămânii a 2-a și începutul săptămânii a 3-a, salmonela începe să apară. să fie excretat din organism în fecale, urină, salivă etc.
Perioada de convalescență (recuperare) se caracterizează prin curățarea organismului de agentul patogen, creșterea activității fagocitare a celulelor și acumularea de anticorpi în sânge.
Cu toate acestea, cu febra tifoidă și febra paratifoidă, excreția bacteriană adesea nu se termină cu recuperarea pacientului - se formează transportul bacterian. Fenomenele inflamatorii cronice din vezica biliară contribuie la supraviețuirea salmonelei din bilă și la excreția lor pe termen lung din organism (uneori până la câțiva ani).
Imunitate. Imunitatea post-infecțioasă este destul de intensă și de lungă durată. Bolile recurente sunt rare. În cursul bolii, se produc anticorpi: la sfârșitul primei săptămâni apar aglutinine, precipitine și alte tipuri de anticorpi. Numărul acestora crește, atingând un maxim în a 14-15-a zi de boală. Anticorpii rămân în serul de sânge al unei persoane care a fost bolnavă de mult timp.
Activitatea fagocitelor și a altor factori de apărare celulară sunt, de asemenea, importante în formarea stării imunitare a organismului.
Prevenirea. Menținerea igienei personale și realizarea tuturor măsurilor sanitare și igienice: supravegherea alimentării cu apă, controlul produselor alimentare și al întreprinderilor Catering.
Prevenirea specifică. Un vaccin chimic care conține antigeni completi ai agenților cauzali ai febrei tifoide, ai paratifoidei A și B și a anatoxinei tetanice (TAB"te). Există, de asemenea, un vaccin împotriva alcoolului tifoid îmbogățit cu antigen Vi, a cărui administrare în scop profilactic dă un bun efect.La izbucnirea bolii, persoanelor în contact cu pacienții li se administrează bacteriofag tifoid.
Tratament. Antibiotice: cloramfenicol, tetraciclina etc.
Boli transmise prin alimente
Atunci când se consumă produse contaminate cu Salmonella de diferite serovari (cu excepția S. typhi, S. paratyphi A și B), apar boli alimentare.
Surse de infecție. Animale și păsări bolnave de salmoneloză, sau sănătoase, în organismul cărora, fără să provoace rău, se află salmonela.
Căile de transmisie. Infecția apare prin consumul de carne, produse din carne, ouă, lapte și produse lactate infectate cu salmonella. Cel mai periculos este consumul de alimente în care Salmonella se înmulțește și moare și se acumulează endotoxina.
Patogeneza. Odată intrat în organism prin gură, salmonella pătrunde în tractul digestiv. În acest caz, o parte semnificativă a bacteriilor moare și este eliberată endotoxina, care poate pătrunde în sânge. Apar simptome de afectare a tractului gastrointestinal și toxicoză generală. Boala durează nu mai mult de 4-5 zile; uneori cei care și-au revenit devin purtători de salmonella.
Imunitate de scurtă durată. În sângele pacienților și convalescenților se acumulează diverși anticorpi: aglutinine, precipitine etc. Există o mulțime de serovare de Salmonella, iar imunitatea este specifică, adică este direcționată numai împotriva unui agent patogen, astfel încât o persoană poate face din nou salmoneloză.
Prevenirea. Control strict veterinar și sanitar constant asupra animalelor, sacrificarea și tăierea carcaselor, depozitarea și prelucrarea cărnii și a produselor din carne. Este necesar să se respecte cu strictețe regimul sanitar și igiena personală în unitățile de alimentație publică.
Prevenirea specifică. Persoanele din zonele cu boli de origine alimentară ar trebui să primească bacteriofag polivalent Salmonella.
Tratament. Principalul agent terapeutic este detoxifierea organismului - administrarea unor cantitati mari de lichid, spalatura gastrica. De asemenea, se folosesc antibiotice.
Infecția cu salmonella dobândită în spital
Agentul cauzal al infecției nosocomiale cu Salmonella este cel mai adesea S. typhimurim. Există, de asemenea, focare „de spital” cauzate de S. heidelberg, S. derby etc. Deși proprietățile morfologice și culturale ale acestor agenți patogeni nu diferă de proprietățile altor Salmonella, există unele caracteristici biologice, caracteristice acestora. De exemplu, agenții patogeni ai infecțiilor nosocomiale aparțin anumitor biovaruri; ei sunt mai patogeni pentru șoarecii albi etc.
Surse de infecție. Mai des un purtător de bacterii, mai rar un pacient.
Căile de transmisie. Predomină contactul indirect (jucării, lenjerie, articole de îngrijire a pacientului). Mai puțin frecvente sunt căile de transmitere a prafului din aer și a alimentelor.
Patogeneza. Boala se dezvoltă pe fondul slăbirii organismului și scăderii activității sale imunitare. Agentul patogen pătrunde în organism pe cale orală sau prin tractul respirator, ceea ce determină dezvoltarea procesului patologic: disfuncție a tractului gastrointestinal cu deshidratare sau afectare a sistemului respirator, bacteriemie, complicații septice. Copiii mici sunt primii care se îmbolnăvesc.
Imunitate. Produs numai în legătură cu un singur serovar Salmonella.
Prevenirea. Respectarea strictă a regimului sanitar și igienic în instituțiile medicale.
Prevenirea specifică. Dacă apare o infecție nosocomială cu Salmonella, copiilor care au fost în contact cu pacientul trebuie să li se administreze bacteriofag polivalent Salmonella.
Tratament. Simptomatic.
Întrebări de control
1. Care sunt proprietățile morfologice, culturale și enzimatice ale Salmonella?
2. Pe ce se bazează clasificarea Salmonella?
3. Ce boli sunt cauzate de salmonella?
Examen microbiologic
Scopul studiului: izolarea agenților patogeni și determinarea serovarului Salmonella.
Material pentru cercetare
2. Mișcările intestinale.
4. Conținutul duodenal.
În funcție de stadiul bolii, se examinează material diferit.
Conținutul de rozeola, măduva osoasă, sputa și materialul obținut la autopsie - bucăți de organe - pot fi, de asemenea, examinate.
Pentru infecțiile toxice, materialul pentru cercetare poate fi ape de clătire stomac, vărsături, reziduuri alimentare.
Indiferent de natura materialului luat pentru cercetare, din momentul izolării culturii pure, cercetarea se realizează după schema generală.
Metode de cercetare de bază
1. Bacteriologic (Fig. 43).
2. Serologic.
Progresul studiului
A doua zi de studiu
Scoateți vasele din termostat (incubare timp de 18-24 ore) și examinați coloniile crescute cu ochiul liber și folosind o lupă. Mai multe (5-6) colonii suspecte sunt izolate pe mediu Olkenitsky sau Russell. Inocularea se efectuează astfel: cu grijă, fără a atinge marginile tubului, colonia îndepărtată este introdusă în lichidul de condensare, apoi întreaga suprafață teșită a mediului este inoculată cu dungi și se face o injecție în adâncimea coloanei. pentru a detecta formarea de gaze. Injecția trebuie făcută în centrul coloanei de agar.
Eprubete cu culturi sunt plasate într-un termostat. Dacă materialul studiat a fost semănat pe un mediu de îmbogățire, atunci după 18-24 de ore se seamănă din mediul de îmbogățire pe plăci cu medii diferențiale. Cercetările ulterioare sunt efectuate conform schemei generale.
1 (Un semn negru rămâne în locul coloniilor îndepărtate (culoarea mediului se schimbă).)
A treia zi de studiu
Scoateți eprubetele cu culturile din termostat și examinați modelul de creștere.
Compoziția mediilor combinate include lactoză, glucoză, uneori uree și un indicator. Descompunerea glucozei are loc numai în condiții de anaerobioză. Prin urmare, suprafața teșită a mediului nu se modifică în timpul descompunerii glucozei, iar coloana este vopsită într-o culoare corespunzătoare indicatorului. Bacteriile care descompun lactoza și ureea schimbă culoarea întregului mediu.
Dacă culturile izolate fermentează lactoza sau descompun ureea, schimbând culoarea întregului mediu, atunci nu sunt salmonella și se poate da un răspuns negativ.
Cultura care descompune numai glucoza este supusă unui studiu suplimentar: se fac frotiuri, se colorează cu Gram și se examinează microscopic. Dacă în frotiuri sunt prezente baghete gram-negative, se studiază mobilitatea și proprietățile enzimatice ale acestora.
Motilitatea poate fi determinată într-o picătură suspendată sau zdrobită și poate fi determinată și de modelul de creștere în mediu Hiss semisolid sau în agar 0,2%. Dacă în timpul semănării prin injecție există motilitate, creșterea pe mediu este difuză, mediul devine tulbure.
Pentru a detecta activitatea enzimatică, inocularea se efectuează pe medii Hiss, MPB și apă peptonă. Hârtiile indicatoare sunt coborâte (sub dop) în eprubete cu mediul din urmă pentru a determina indolul și hidrogenul sulfurat. Ei fac, de asemenea, un test de cultură pentru laptele de turnesol.
A patra zi de cercetare
Activitatea biochimică este luată în considerare pe baza rezultatului fermentației carbohidraților și a altor medii (vezi Tabelul 33).
Notă. k - formarea acidului; kg - formarea de acid și gaz; u - alcalii; + prezența proprietății; - lipsa proprietatii.
După ce au determinat proprietățile morfologice, culturale și enzimatice ale culturii izolate, este necesar să se analizeze structura antigenică (Tabelul 34).
Identificarea serologică a Salmonelei începe cu o reacție de aglutinare pe sticlă cu O-ser polivalent A, B, C, D, E. În absența aglutinării, cultura izolată este testată cu O-ser polivalent pentru grupuri rare de Salmonella. Dacă există o reacție pozitivă cu unul dintre seruri, cultura este testată cu fiecare ser O inclus în serul polivalent pentru a determina serogrupul O. După ce s-a stabilit că o cultură aparține grupului O, antigenele sale H sunt determinate cu seruri din prima și apoi din a doua fază (Tabelul 35).
Cultura de Salmonella typhus este de asemenea testată cu Vi-ser. Patogenii febrei tifoide care conțin antigenul Vi sunt testați cu fagi Vi (există 86 dintre ei). Determinarea fagotipului are o mare importanță epidemiologică (vezi Fig. 43).
Tehnica de fagotipare. 1a metoda. 20-25 ml de agar se toarnă în vase Petri și se usucă cu capacele deschise într-un termostat. Fundul cupei este împărțit în sectoare. Numele fagului este scris pe fiecare sector. Se studiază o cultură în bulion de 4-6 ore deoarece conține mai mult antigen Vi. Aplicați 8-10 picături de cultură în bulion pe suprafața agarului și frecați-o pe suprafața agarului cu o spatulă de sticlă. Cupele cu culturile se usucă cu capacele deschise într-un termostat. Pe fiecare sector se aplică o picătură de tipul de fag corespunzător. După ce picăturile s-au uscat, cupele se pun într-un termostat timp de 18-24 ore.Rezultatul se măsoară cu ochiul liber sau cu lupa prin fundul cupei.
Prezența lizei unei culturi de către unul sau mai mulți fagi tipici face posibilă determinarea dacă tulpina izolată aparține unui tip de fag specific.
a 2-a metoda. Cultura se aplică prin picurare pe mediul nutritiv. După ce cultura s-a uscat într-un termostat, pe fiecare picătură se aplică o picătură dintr-un fag tipic. Puneți-l în termostat.
Gradul de liză este exprimat folosind sistemul cu patru încrucișări.
Întrebări de control
1. Ce material este examinat pentru febră tifoidă, febră paratifoidă și infecții toxice?
2. În ce perioadă a bolii se utilizează metoda hemoculturii?
3. În ce perioadă a bolii cu febră tifoidă și paratifoidă se examinează fecalele și urina?
4. Ce medii de diagnostic diferenţial sunt utilizate pentru inocularea materialului de testat?
5. Ce medii se folosesc pentru acumularea de salmonella?
6. Ce este determinat de serul monoreceptor O și ce este determinat de serul monoreceptor H?
1. Studiază din tabel. 32 model de creștere a salmonellei pe medii diferențiale. Uitați-vă la profesor pentru plăci inoculate cu Salmonella typhus pe medii Endo, Ploskirev și agar bismut-sulfit. Desenează coloniile cu creioane colorate și arată-le profesorului tău.
2. Luați cultură de salmonella, seruri de monoreceptori O și H de la profesor. Efectuați o reacție de aglutinare pe sticlă. Luați în considerare reacția și arătați-o profesorului.
Cultura izolată a dat o reacție de aglutinare pozitivă cu O-ser 4. Cu ce ser H ar trebui să se efectueze o reacție de aglutinare dacă credeți că aceasta este o cultură de Salmonella paratifoid B?
Diagnosticul serologic al febrei tifoide și paratifoide
Reacția Vidal. Din a doua săptămână de boală, anticorpii împotriva agentului infecțios se acumulează în sângele pacienților. Pentru a le identifica, serul sanguin al pacientului este examinat într-o reacție de aglutinare. Culturile de Salmonella ucise - diagnosticums - sunt folosite ca antigene.
Pentru a efectua reacția Widal, se utilizează serul pacientului, un set de truse de diagnosticare și o soluție izotonică de clorură de sodiu.
Sângele (2-3 ml) din pulpa degetului sau vena cubitală este colectat într-un tub steril și livrat la laborator. În laborator, eprubeta se pune într-un termostat timp de 20-30 de minute pentru a forma un cheag, apoi se folosește o pipetă Pasteur pentru a încercui cheagul pentru a-l separa de peretele eprubetei și se pune la rece. timp de 30-40 de minute. Serul separat este aspirat și folosit pentru a efectua o reacție de aglutinare cu diagnostice de Salmonella typhus și febră paratifoidă. Sângele poate fi centrifugat pentru a obține ser.
Când are loc un proces infecțios - febră tifoidă sau febră paratifoidă - organismul produce anticorpi O- și H pentru aceiași antigeni ai agentului patogen.
Anticorpii O apar mai întâi și dispar destul de repede. Anticorpii H durează mult timp. Același lucru se întâmplă și în timpul vaccinării, prin urmare o reacție Widal pozitivă cu antigenele O și H indică prezența bolii, iar o reacție numai cu antigenele H poate apărea atât la cei care s-au vindecat după boală (reacție anamnestică), cât și cei vaccinați (reacție la vaccin). Pe baza acestui fapt, reacția Widal este efectuată separat cu antigene O și H (diagnosticums).
Deoarece febra tifoidă și paratifoidul A și B sunt similare clinic, pentru a identifica natura bolii, serul pacientului este testat simultan cu diagnosticul de Salmonella typhus și paratifoid A și B.
Reacția Widal este utilizată pe scară largă deoarece este simplă și nu necesită condiții speciale.
Reacția poate fi efectuată în două moduri: prin picurare și volumetric (vezi capitolul 12). În practică, metoda volumetrică este folosită mai des. La efectuarea unei reacții de aglutinare liniară, numărul de rânduri trebuie să corespundă numărului de antigene (diagnosticums). Agentul cauzal al bolii este considerat a fi un microorganism din care diagnosticul a fost aglutinat de serul pacientului. Uneori se remarcă aglutinarea de grup, deoarece agenții cauzali ai febrei tifoide și paratifoide au antigene de grup comune. În acest caz, rezultatul reacției din seria în care se notează aglutinarea într-o diluție mai mare de ser este considerat pozitiv (Tabelul 36).
Notă. În practică, reacția Widal se realizează cu patru diagnostice: febră tifoidă „O” și „H”, și febră paratifoidă A și B cu diagnostice „ON”.
Dacă aglutinarea are loc numai în diluții mici de ser - 1:100, 1:200, atunci pentru a distinge reacția din timpul bolii de reacția de vaccinare sau anamnestică, se recurge la repetarea reacției de aglutinare după 5-7 zile. La un pacient, titrul de anticorpi crește, dar la o persoană vaccinată sau recuperată nu se modifică. Astfel, o creștere a titrului de anticorpi în serul sanguin servește ca indicator al bolii.
Ca răspuns la introducerea agenților patogeni tifoizi care posedă antigenul Vi în organism, aglutininele Vi apar în sângele pacientului. Sunt detectați din a 2-a săptămână de boală, dar titlul lor nu depășește de obicei 1:10. Detectarea anticorpilor Vi este asociată cu prezența agenților patogeni tifoizi în organism, prin urmare determinarea acestor anticorpi are o mare importanță epidemiologică, deoarece permite identificarea purtătorilor de bacterii.
Reacție de vi-hemaglutinare. Aceasta este cea mai sensibilă reacție pentru detectarea anticorpilor.
Principiul reacției este că eritrocitele umane (grupa I) sau de oaie, după un tratament special, pot adsorbi antigenul Vi pe suprafața lor și astfel dobândesc capacitatea de a se aglutina cu anticorpii Vi corespunzători.
Globulele roșii cu antigene adsorbite la suprafață se numesc eritrocite diagnosticums.
Pentru a efectua reacția de Vi-hemaglutinare, luați:
1) serul sanguin al pacientului (1-2 ml); 2) Salmonella Vi-diagnosticum eritrocitară; H) Vi-ser; 4) O-ser; 5) soluție izotonică de clorură de sodiu.
Reacția se realizează în tuburi de aglutinare sau în plăci de plastic cu godeuri.
Sângele este prelevat de la pacient în același mod ca și pentru reacția Vidal. Se obtine ser. Din ser se prepară diluții în serie de două ori, începând de la 1:10 până la 1:160.
În godeu se adaugă 0,5 ml din fiecare diluție și se adaugă 0,25 ml de diagnostic eritrocitar. Reacția se realizează într-un volum de 0,75 ml.
Martorii sunt: 1) ser monoreceptor aglutinant standard + diagnosticum - reacția trebuie să fie pozitivă până la titrul seric; 2) diagnostic în soluție izotonică de clorură de sodiu (martor) - reacția ar trebui să fie negativă.
Conținutul godeurilor se amestecă bine, se pune într-un termostat timp de 2 ore și se lasă la temperatura camerei până a doua zi (18-24 ore).
Contabilitatea începe cu controlul. Reacția se apreciază în funcție de gradul de aglutinare a diagnosticului.
Rezultatele sunt luate în considerare conform sistemului cu patru cruci:
Celulele roșii din sânge sunt complet aglutinate - sediment în fundul puțului sub forma unei „umbrele”;
+++ „umbrelă” este mai mică, nu toate globulele roșii sunt aglutinate;
++ „umbrela” este mică, în fundul găurii se află un sediment de eritrocite neaglutinate;
Reacția este negativă; globulele roșii nu s-au aglutinat și s-au așezat în fundul puțului sub formă de buton.
Întrebări de control
1. În ce perioadă a bolii se efectuează reacția Vidal?
2. Ce ingrediente sunt necesare pentru a efectua reacția Widal?
3. Ce diagnostice sunt folosite pentru a efectua reacția Vidal?
4. Care reacție serologică este cea mai sensibilă în diagnosticarea infecțiilor tifoide paratifoide?
5. Ce diagnostic se folosește la efectuarea reacției de Vi-hemaglutinare?
6. Ce ser se folosește pentru a determina prezența antigenului Vi în cultura studiată?
7. Care este semnificația determinării fagotipului Vi?
Luați diagnosticul O și H de la Salmonella typhus, paratifoid A și paratifoid B și serul pacientului de la profesor. Dă reacția lui Vidal.
Medii de cultură
EMS, Ploskireva și mediile de agar bismut-sulfit sunt produse de industria medicală sub formă de pulbere uscată. Se prepară conform instrucțiunilor de pe etichetă: se cântărește o anumită cantitate de pulbere, se toarnă cantitatea adecvată de apă, se fierbe și se toarnă în vase Petri sterile.
Russell miercuri. Adăugați 40 g de mediu nutritiv uscat la 950 ml de apă distilată și adăugați 5 g de agar nutritiv. Se încălzește până la fierbere și pulberile se dizolvă. 1 g de x se dizolvă în 50 ml apă distilată. ore de glucoză și se adaugă la amestecul preparat. Mediul este turnat în eprubete sterile de 5-7 ml, sterilizat cu abur curgător (2 zile timp de 2 minute) și teșit astfel încât să rămână o coloană. Mediul Russell cu manitol și zaharoză se prepară în același mod.
Mediul Olkenitsky din agar uscat. 2,5 g de agar nutritiv uscat se topesc în 100 ml apă distilată. Toate ingredientele specificate în rețetă (etichetă) sunt adăugate în agar răcit la 50°C. Mediul turnat în eprubete este sterilizat cu abur curgător (3 zile, câte 20 de minute fiecare) și apoi cosit. Mediul preparat trebuie să fie de culoare roz pal.
13.1.3 Salmonella
În 1880, cercetătorul german K. Ebert a descris pentru prima dată bacteria care provoacă febra tifoidă. În 1884, acest microorganism a fost izolat și studiat cu atenție de G. Gaffki.
Un agent patogen similar care provoacă boli la porci a fost descoperit în 1885 de către D. Salmon. Ulterior, întregul gen căruia îi aparțin aceste bacterii a fost numit Salmonella, iar agentul patogen a fost numit S. choleraesuis .
Mai mult, a fost identificată Salmonella, agenții cauzatori ai bolilor animalelor și a infecțiilor toxice alimentare la oameni - S.enteritidis(A. Gartner, 1888) și S.typhimurium(K. Kensch și E. Nobel, 1898).
Mai târziu, în 1900, G. Schottmuller a studiat în detaliu Salmonella - agenții cauzatori ai infecțiilor paratifoide umane - S. paratyphi B sau S . schottmuelleri. La rândul său, agentul cauzal al paratifoidului A a fost izolat și studiat de A. Brion și G. Kaiser.
Clasificare
Conform taxonomiei moderne, genul Salmonella include doar 2 tipuri - S. entericaȘi S. bongori. Reprezentanții patogeni aparțin numai speciei S. enterica.
Vedere S. enterica include subspecii enterica, salamae, Arizonae, diarizonae, houtenaeȘi indica. Peste 99% dintre bolile umane sunt cauzate de subspecia Salmonella enterica.
Salmonella sunt extrem de variabile antigenic. Sunt cunoscute peste 2500 de serovare. Multă vreme au fost luate în considerare serovarele bacteriene tipuri diferite, care sunt desemnate separat.
Numai serovarele subspeciei au nume proprii enterica. În același timp, numele majorității variantelor lor au devenit frecvent utilizate în practica medicală.
Serovariile altor subspecii sunt desemnate prin numere.
La om, Salmonella este cauzată de substanțe antroponotice ( febră tifoidă, febră paratifoidă) și infecții zooantroponotice ( salmonela).
Agentul cauzal al febrei tifoide este S. enterica serovar Typhi. Numele său scurt, ținând cont de numele serovarului, este S. Typhi (indicat într-un font non-italic cu majuscule).
Agenții cauzali ai bolilor paratifoide sunt S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S. Paratyphi C.
Principalele serovare care provoacă salmoneloza sunt S. Enteritidis și S. Typhimurium. Multe alte variante pot provoca și aceste boli (S. Choleraesuis, S. Heidelberg, S. Derby etc.)
Morfologie
Toate Salmonella sunt baghete gram-negative mobile, au mai multe pili și flageli (peritrici), nu formează spori și pot avea o capsulă de polizaharidă.
Proprietăți culturale
Anaerobi facultativi, chemoorganotrofi.
Capabil să crească la temperaturi de la 8 la 45 0 C.
Se reproduc bine pe medii nutritive simple. Pe MPA formează colonii translucide, incolore.
Mediile biliare sunt selective (bulion de bilă, mediu Rapoport lichid cu glucoză, săruri biliare și indicator Andrade). Capabil să crească în bulion selenit.
În mediile lichide, formele S provoacă turbiditate uniformă.
Pe medii de diagnostic diferenţial, Endo, Levin şi McConkey formează colonii incolore, deoarece Salmonella nu descompune lactoza.
Mediul selectiv pentru salmonella este agarul bismut-sulfit, unde acestea cresc sub forma de colonii negre lucioase.
Proprietăți biochimice
Salmonella fermentează carbohidrații (glucoză, maltoză, manitol, arabinoză, manoză) pentru a produce acid și gaz. Nu fermentează lactoza sau zaharoza.
Spre deosebire de alte serovare, S. Typhi nu produce gaze în timpul fermentației carbohidraților.
Când proteinele sunt descompuse, ele formează hidrogen sulfurat, cu excepția S. Paratyphi A. Nu formează indol.
Oxidază negativă, catalază pozitivă
Structura antigenică și clasificarea Kaufman-White
Salmonella are 3 antigene principale: O-AG, N-AG și unii - Vi-AG capsular.
O-antigen stabil la căldură, poate rezista la fierbere timp de 2,5 ore. Este un LPS de perete celular care are proprietăți de endotoxină.
H-antigen– flagelate, termolabile, distruse la temperatura de 75-100 o C. Este o proteina flagelina.
Spre deosebire de alte enterobacteriacee, are 2 faze: primul - specific iar al doilea - nespecific. Fazele sunt antigene separate care sunt determinate de gene diferite. Majoritatea Salmonella sunt bifazice. Există salmonele monofazice care exprimă o singură variantă de H-AG.
F. Kaufman și P. White au clasificat Salmonella după structura lor antigenică.
Conform O-AG, toate salmonelele sunt împărțite în 67 de grupuri (A, B, C, D, E etc.) Un grup include salmonella care au un determinant comun de antigen O, indicat printr-un număr.
Conform H-AG, Salmonella sunt împărțite în serovariuri în grupuri. Faza 1 specifică a antigenului H este indicată cu litere mici latine, faza 2 - cu cifre arabe (sau împreună cu litere latine). Pe baza primei faze a antigenului H, serovarul este determinat direct.
Vi-AG aparține grupului de AG superficiale sau capsulare. În cele mai multe cazuri, se găsește numai în S. Typhi, rar în S. Paratyphi C și S. Dublin.
Este termolabil, complet distrus când este fiert timp de 10 minute și parțial inactivat la o temperatură de 60 o C timp de 1 oră.
Salmonella care are antigenul Vi sunt lizate de bacteriofagii tifoizi Vi. Tiparea fagilor este efectuată pentru a determina sursa de infecție, care are o semnificație epidemiologică. Sunt cunoscute aproximativ 100 de fagotipuri. Polizaharida Vi-AG asigură interacțiune specifică cu fagii Vi.
Factori de patogenitate
Salmonella are cel puțin 10 insule genetice de patogenitate, care pot fi găsite în mulți agenți patogeni. În plus, S.Typhi are insula principală a patogenității, deosebindu-l de alți reprezentanți.
Două insule principale de patogenitate joacă un rol principal în patogenia infecțiilor SPI-1 Și SPI-2 , localizat în nucleoid. Unele dintre genele de pe aceste insule au fost obținute ca urmare a transducției bacteriofagelor temperate.
Ambele insule sunt responsabile pentru formarea structurilor IIItip de secreție(injectisȘi proteine efectoare invazie), dar aceste structuri sunt diferite .
Molecule efectoare insulareSPI-1 sunt responsabili de pătrunderea agentului patogen în celulele epiteliale și de dezvoltarea enterocolitei.
Unii dintre ei se formează injectizom(sau complex de acupunctură). Restul, după contactul bacteriilor cu epiteliul, intră în celule folosind injectizomi.
Ele rearanjează actina citoscheletului celular, ceea ce duce la formarea de pliuri pe suprafața celulelor M ale peticelor Peyer și a epiteliului intestinal. Astfel, celulele epiteliale capătă capacitatea de a capta bacteriile care pătrund în interior prin macropinocitoză.
În plus, proteinele de virulență a insulei SPI-1 activează canalele membranare din epiteliu, ceea ce crește secreția de clorură și duce la diaree.
Când aceste molecule intră în macrofage, ele activează caspaza-1. Pe de o parte, aceasta stimulează producerea de citokine proinflamatorii (IL 1, chemokină neutrofilă IL 8 etc.) Pe de altă parte, este activată moartea macrofagelor prin apoptoză. Astfel, aceste proteine determină un proces imunoinflamator în peretele intestinal cu pătrunderea neutrofilelor acolo.
Molecule efectoare o altă insulă de patogenitate SPI-2 responsabil pentru supraviețuirea bacteriilor din interiorul fagocitelor și celulelor organelor afectate. Astfel, ele determină dezvoltarea nu a localului, ci sistemică infecții cu salmoneloză.
Se formează și proteine insulare SPI-2 injectizom. După ce agentul patogen intră în fagocit, acesta este situat în interiorul vacuolei, unde este capabil să se înmulțească. Moleculele efectoare inhibă enzimele de explozie respiratorie, ceea ce asigură supraviețuirea bacteriilor pe termen lung. În plus, aceste proteine mențin structura peretelui vacuolelor care conțin Salmonella.
O altă insulă de patogenitate SPI-3 codifică enzimele care furnizează salmonellei cationi de magneziu. De asemenea, este necesar pentru supraviețuirea bacteriilor din interiorul fagocitelor.
Când este distrusă, Salmonella este eliberată endotoxină, care prin receptorii TLR-4 de pe celule stimulează eliberarea de citokine proinflamatorii. Are efect pirogen și dăunează endoteliului vascular.
Unii agenți patogeni sunt capabili să producă enterotoxine care provoacă diaree secretorie.
Insulă principală de patogenitate S.Typhi determină gradul invaziv al agentului patogen, precum și capacitatea de a produce Vi-AG capsular.
Două plasmide S.Typhi conțin gene de rezistență la antibiotice. În plus, unele Salmonella au un set de gene pentru rezistența multiplă la antibiotice, care sunt localizate în nucleoid.
Rezistenţă
În mediul extern, Salmonella își păstrează viabilitatea mult timp: în apă deschisă trăiește până la 120 de zile, în apă de mare până la o lună, în sol până la 9 luni, în praful camerei până la 1,5 ani. , in carnati 2-4 luni, in carne congelata si oua pana la 1 an. Salmonella nu doar persistă în produse, ci se înmulțește și (lapte, smântână, brânză de vaci, carne tocată). Muștele pot juca un rol în contaminarea alimentelor.
Bacteriile tolerează bine temperaturile scăzute, dar sunt sensibile la temperaturile ridicate – când sunt încălzite la 60 0 C mor după 30 de minute, la 100 0 C – aproape instantaneu. Dezinfectanții (cloramină, hipoclorit, Lysol) în concentrații normale ucid agenții patogeni în câteva minute.
Caracteristicile bolilor
Salmonella provoacă 3 grupe de leziuni: febră tifoidă și paratifoidă, Salmonella gastroenteritaȘi septicemie. Dezvoltarea lor depinde de virulența agentului patogen, de doza sa infecțioasă și de starea de imunitate a macroorganismului. Pentru ca febra tifoidă să apară, sunt necesare 10 3 -10 5 celule microbiene. Pentru dezvoltarea salmonelozei, doza infectantă este semnificativ mai mare - 10 6 -10 9 bacterii, dar cu virulență ridicată a agentului patogen sau cu starea de imunodeficiență a unei persoane, numărul de bacterii poate fi de multe ori mai mic.
Febra tifoidă și bolile paratifoide
Febră tifoidăȘi paratifoid– acestea sunt picante boli infecțioase, care se caracterizează prin afectarea inflamatorie a intestinului subțire cu distrugerea țesutului limfoid și ulcerații, bacteriemie, febră, intoxicație generală, mărirea splinei și ficatului.
Febra tifoidă este cea mai severă.
Această boală pune o problemă serioasă de sănătate, mai ales în țările în curs de dezvoltare. În fiecare an, în lume apar între 15 și 30 de milioane de cazuri de febră tifoidă, cu 250 până la 500 de mii de decese înregistrate. În țările în curs de dezvoltare, afectează în principal copiii și tinerii. În țările dezvoltate, boala apare în cazuri sporadice.
Febra tifoidă și paratifoida A - infectii antroponotice, al cărui rezervor este omul. Agenții cauzali ai paratifoidului B și C au fost, de asemenea, izolați de la unele animale și păsări.
Surse de infecție sunt pacienți sau purtători de bacterii care excretă agentul patogen în fecale, urină sau salivă. Principalul mecanism de infectare– fecal-oral (apă, alimente și căi de contact-gospodărie).
Perioadă incubație poate dura până la 2-3 săptămâni.
Când sunt ingerate pe cale orală, bacteriile pătrund în barierele protectoare ale stomacului și intră în intestinul subțire ( faza de infectare). Cel mai important rol în patogeneză îl joacă proteine ale sistemului invazivIIItip de secreție(Vezi deasupra). Unele dintre proteinele de invazie prezintă translocaza activitate – formă injectizomși asigură pătrunderea Salmonella în celulele M epiteliale și enterocite. Restul blochează metabolismul celulelor infectate, ducând la întreruperea funcției acestora. Există o creștere a producției de chemokine (de exemplu, IL-8) și alte citokine proinflamatorii de către enterocite și macrofage intestinale.
Salmonella rămâne viabilă în vacuolele celulelor afectate și provoacă apoptoza macrofagelor prin activarea caspazei-1.
Ca urmare a perturbării barierei hemolimfatice, Salmonella intră în sânge ( faza de bacteriemie). Agenții cauzali ai febrei tifoide supraviețuiesc și se înmulțesc în fagocite, iar după moartea acestora din urmă în cantitati mari intra in sange. în care Vi-AG inhibă acţiunea factorilor bactericid serici şi fagocitari.
În acest moment, apar simptome clinice ale bolii ( prima săptămână de boală). Temperatura se ridică la 39-40 o. Sub influența proprietăților bactericide ale sângelui și din cauza fagocitozei, salmonella este distrusă și eliberată. endotoxină, care afectează vasele de microcirculație și are un efect neurotrop pronunțat. În cazuri severe, ca urmare a leziunilor sistemului nervos central, starea tyfosus(dureri de cap severe, insomnie, slăbiciune severă, apatie, tulburări de conștiență, chiar comă). Leziunile intestinale sunt însoțite de umflarea și descuamarea epiteliului. O tulburare a sistemului nervos autonom este însoțită de flatulență și dureri abdominale. Se dezvoltă diaree.
La 2 saptamani de boala (înălțimea bolii) Salmonella se răspândește prin sânge la organele interne, afectând ficatul, vezica biliara, splină, rinichi, apare o erupție cutanată pe piele. Din a 2-a săptămână, salmonella cu bilă intră din nou în intestinul subțire, ale cărui formațiuni limfoide sunt deja sensibilizate cu antigene de salmonella. Ca urmare, există răspuns inflamator autoimun, uneori se formează necroza în locurile unde se acumulează celule limfoide. Necroza membranei mucoase poate duce la sângerare și perforare intestinală.
După înălțimea bolii are loc o treptă stingerea manifestărilor clinice boli. Eliberarea agenților patogeni din organism are loc în fecale, urină, transpirație, saliva și laptele matern (la femeile care alăptează). Răspunsul imun asigură eliminarea treptată a Salmonella.
Pacienții tratați cu antibiotice sunt externați din spital nu mai devreme de a 21-a zi de temperatură normală. Înainte de externare, se efectuează o examinare bacteriologică de trei ori a fecalelor și urinei și o singură examinare a bilei.
De obicei boala se termină recuperare. Mortalitatea nu depășește 0,5-1%. Cu toate acestea, în absența unei îngrijiri medicale adecvate, focarele izolate de febră tifoidă din țările tropicale au avut rate de mortalitate care depășesc 30%.
Febra paratifoidă A și B evoluează mai favorabil. Simptomele lor clinice sunt similare. În general, aceste boli se caracterizează printr-o evoluție mai blândă în comparație cu febra tifoidă.
Imunitate
După o infecție, imunitatea este în general stabilă, dar pot apărea recidive și boli repetate.
Recuperarea nu se termină întotdeauna cu eliberarea completă de agentul patogen. Mai mult de 2% dintre pacienți au purtător de bacterii. Deoarece bacteriile sunt rezistente la bilă, acestea sunt concentrate în vezica biliară, izolate de acțiunea factorilor imunitari. Astfel de agenți patogeni produc cantități crescute de Vi-AG. Capabil să persiste în interiorul macrofagelor.
Purtătorii de bacterii sunt periculoși ca surse de infecție. Ei pot reține agenți patogeni timp de mai multe luni. La purtătorii cronici, a fost detectată o deficiență de anticorpi IgM împotriva O-AG.
Transportul agenților patogeni paratifoizi apare mai des decât în cazul febrei tifoide, dar durează mai puțin – în câteva săptămâni.
Diagnosticul de laborator al febrei tifoide
Utilizare bacteriologicȘi metode serologice care se efectuează ținând cont de perioada procesului infecțios.
Material pentru evidentiere sunt sânge ( hemocultură), excremente ( coprocultura), urina ( cultură de urină), conținut duodenal, bilă ( bicultura), răzuire roseola, măduvă osoasă.
ÎN cercetare bacteriologică metoda timpurie este izolarea agentului patogen din sânge (hemocultură) în perioada de bacteriemie (prima săptămână a bolii).
Sângele este inoculat în bulion de bilă sau mediu Rapoport într-un raport de 1:10 (pentru a reduce proprietățile bactericide ale proteinelor din sânge). În a 2-a zi, se efectuează subcultura pe mediu Endo sau Levin, sau pe agar sulfit de bismut. Coloniile suspecte (transparente sau negre în funcție de mediu) sunt subcultivate pe agar-agar sau pe unul dintre mediile combinate (Olkenitsky, Ressel, Kligler). Pe aceste medii, pentru identificarea primară, se determină fermentarea glucozei, capacitatea de a forma gaze, eliberarea de hidrogen sulfurat și absența ureazei.
În același timp, se studiază morfologia și proprietățile tinctoriale.
Sunt determinate proprietățile biochimice. Bacteriile din grupul tifoid-paratifoid nu descompun zaharoza, lactoza și nu formează indol.
La izolarea culturilor care au proprietăți enzimatice caracteristice Salmonella, se studiază structura antigenică a acestora într-o reacție de aglutinare a sticlei cu antiseruri de diagnostic O- și H, se determină sensibilitatea la antibiotice și se realizează tiparea fagilor.
Pentru serologic Pentru diagnosticul febrei tifoide și febrei paratifoide din a 5-a până la a 7-a zi de boală se utilizează în principal RPGA cu diagnostice de O- și N-eritrocite. O reacție cu un titru de 1:160 sau mai mare este considerată pozitivă. Când este examinat în RPGA, titrul de anticorpi crește pe parcursul bolii.
Este posibil să se utilizeze reacția de aglutinare Widal cu monodiagnostic O- și H la agenți patogeni specifici (titru de reacție pozitiv - 1:200 și mai sus). Diagnosticul serologic este retrospectiv.
Pentru a identifica purtătorii de bacterii utilizați RPGA cu eritrocita Vi-diagnosticum (titru de reacție – 1:40). Ei studiază biliara și coprocultura. Fagotiparea se realizează cu antigenul Vi-1.
În timpul focarelor epidemice de febră tifoidă, RIF și ELISA sunt utilizate pentru diagnosticare expresă pentru a detecta hipertensiunea în sânge, măduva osoasă și alte materiale.
Tratamentul febrei tifoide
Terapia etiotropă se efectuează imediat după stabilirea diagnosticului clinic. Fluorochinolonele sunt utilizate pentru tratament. În caz de rezistență la acestea, se folosesc cefalosporine de generația a treia și azitromicină.
Levomicetina și co-trimoxazolul sunt utilizate în prezent mai puțin frecvent din cauza răspândirii tulpinilor multirezistente. Tratamentul patogenetic include terapia de infuzie-detoxifiere.
Prevenirea
Se întreprind măsuri sanitare, igienice și antiepidemice care vizează neutralizarea surselor de infecție, suprimarea căilor de transmitere și creșterea imunității organismului.
Pentru imunoprofilaxia specifică a febrei tifoide au fost dezvoltate 3 tipuri de vaccinuri. Se folosesc vaccinuri inactivate (50-70% eficiente); s-a dezvoltat un vaccin viu atenuat din tulpina Tu21a (are un efect protector mai mare, se afla in stadiul de studii clinice). Un vaccin polizaharidic realizat din antigenul Vi al S. typhi este eficient (De exemplu, Vianvac pr-va Federația Rusă), utilizat conform indicațiilor epidemiologice, efectul protector durează până la 2 ani.
Salmonella
Salmonella– un grup de boli infecțioase acute polietiologice ale omului, animalelor și păsărilor, caracterizate prin afectarea predominantă a tractului gastro-intestinal, diaree și bacteriemie.
Cea mai frecventă formă clinică de infecție cu Salmonella este gastroenterita cu salmonella. Principalii agenți cauzali ai gastroenteritei sunt: S. Enteritidis, S. Choleraesuis, S. Anatum, S. Derby, deși bolile pot fi cauzate de multe alte variante de bacterii.
O formă mult mai gravă este infecția generalizată cu salmonella - septicemie. Principalul său agent patogen este S. Typhimurium.
Majoritatea agenților patogeni sunt izolați de la diferite animale (rezervorul principal) și oameni.
Sursa de infectie oamenii sunt cel mai adesea păsări de curte (50%), în special găini și rațe, precum și ouăle acestora (salmonella poate pătrunde în coaja din interior). Transportul Salmonella a fost detectat la animale, câini, pisici, rozătoare și la multe animale și păsări sălbatice. Animalele infectate excretă bacterii în urină și fecale, lapte și salivă, poluând mediul.
De bază calea de transmisie salmonella - alimente. Bolile apar la om din cauza consumului de produse din carne (vită, porc - până la 20% din cazuri, carne de pasăre), ouă, și mai rar - pește, legume, fructe, crustacee, raci, crabi.
Carnea se poate infecta în mod endogen în timpul vieții animalului în timpul bolii sale, precum și exogen în timpul transportului, procesării și depozitării. Uneori, alimentele se infectează din cauza gătirii sau gătirii necorespunzătoare.
Nerespectarea standardelor sanitare și igienice poate duce la cale de contact-gospodărie transmisie, ceea ce este tipic pentru focare nosocomiale salmoneloza. Astfel de focare au fost observate în maternități, spitale chirurgicale, pentru copii și alte spitale. În salmoneloza dobândită în spital, S. typhimurium este mai des izolat și S. Haifa. În Republica Belarus, infecțiile cu salmonella reprezintă mai mult de 50% din toate cazurile de infecții în spital
Agenții cauzali ai salmonelozei dobândite în spital sunt foarte rezistenți la medicamentele chimioterapeutice și la antibiotice.
Copiii sub 1 an și persoanele cu diferite imunodeficiențe sunt cele mai susceptibile la salmoneloză.
Perioada de incubație a bolii este de la 2-6 ore până la 2-3 zile (în medie 7-24 ore).
Patogenia salmonelozei este determinată de factorii de virulență ai agenților patogeni. Dintre acestea, cel mai important rol îl au proteinele invazive de secreție de tip III.
Unele dintre proteinele de invazie asigură pătrunderea Salmonella în celulele epiteliale intestinale și supraviețuirea lor în interiorul vacuolelor. În plus, stimulează eliberarea de citokine și chemokine proinflamatorii din celulele afectate și apoptoza macrofagelor.
În interiorul macrofagelor, bacteriile nu numai că se înmulțesc, dar și mor parțial odată cu eliberarea de endotoxină, care afectează sistemul neurovascular al intestinului și crește permeabilitatea membranelor celulare.
În termen de 1 oră de la pătrunderea salmonelei în celule, se dezvoltă o infiltrație neutrofilă pronunțată a peretelui intestinal. Inflamația intestinală este însoțită de eliberarea de proteine din enterocitele afectate, creșterea secreției de cloruri cu dezvoltarea diareei abundente.
Unele Salmonella pot produce enterotoxină, care, prin creșterea conținutului de cAMP din enterocite, stimulează excreția de cloruri, ceea ce agravează diareea.
În cele mai multe cazuri, în această etapă procesul infecțios poate fi finalizat ( formă gastrointestinală).
În cazurile severe, apar bacteriemie și generalizarea infecției, ceea ce duce la septicemie.
Această formă de salmoneloză este cea mai tipică pentru S. Typhimurium și S. Enteritidis. Dezvoltarea sa este determinată de proteinele de virulență, care sunt codificate de insula de patogenitate SPI-2 . Aceste proteine suprimă fagocitoza, ceea ce asigură supraviețuirea și reproducerea bacteriilor în interiorul fagocitelor, pătrunderea lor în sânge și în organele parenchimatoase.
Ca urmare, Salmonella poate provoca modificări distrofice în organele afectate (splină, ficat) cu formarea de focare purulente secundare.
De obicei, boala se termină cu recuperare, dar formele septice de infecție pot duce la moarte.
Imunitate
Imunitatea post-infecțioasă este de scurtă durată, instabilă și specifică tipului. Aglutininele, precipitinele, bacteriolizinele și alți anticorpi se găsesc în serul pacienților și al convalescenților. O boală cauzată de un serovar nu creează imunitate față de alții, iar o infecție anterioară nu exclude reinfecția.
Diagnosticul de laborator al salmonelozei
Baza diagnosticului este metoda bacteriologica. Pentru cercetare iau diverse materiale: fecale, vărsături, lavaj gastric, urină, resturi alimentare, precum și produsele inițiale utilizate pentru prepararea acestuia; spălări de la diverse echipamente și obiecte.
Pentru a diagnostica septicemia, se examinează sânge.
Ca medii de îmbogățire se folosesc bulion selenit, agar selenit și bulion biliar 20%. Dintre mediile de diagnostic diferenţial pentru culturi primare şi culturi din medii de îmbogăţire se disting medii selective (agar bismut sulfit sau agar verde strălucitor) şi medii de diagnostic diferenţial (Endo şi Levina). Coloniile suspecte sunt subcultivate în tuburi cu unul dintre mediile combinate (Olkenitsky, Kligler, Ressel) și pe un MPA înclinat.
Sunt studiate proprietățile morfologice, tinctoriale și biochimice ale agenților patogeni.
Cu culturi crescute pe MPA, se desfășoară tipărirea serologică conform schemei Kaufman-White. Pe sticlă se realizează o reacție de aglutinare cu antiseruri de aglutinare O și H. Pe baza rezultatelor reacției se face un diagnostic bacteriologic final.
Serologic diagnosticele sunt rar utilizate (RA, RPGA).
Au fost dezvoltate metode ELISA pentru Detectarea antigenului Salmonellaîn sânge și urină.
Tratament
Terapia patogenetică pentru salmoneloză vizează detoxifierea, restabilirea echilibrului hidro-electrolitic și hemodinamica. Terapia antibacteriană pentru formele ușoare de gastroenterită nu este indicată. În caz de infecție generalizată, se prescriu fluorochinolone; în caz de rezistență la acestea, se prescriu cefalosporine de generația a treia (ceftriaxonă).
În tratamentul complex al salmonelozei, este posibil să se utilizeze un bacteriofag polivalent de salmonella.
Prevenirea
Include masuri veterinar-sanitare, sanitar-igienice si antiepidemice. În cazul unui focar intraspitalicesc de salmoneloză, se instituie un regim special de operare pentru unitatea de tratament și prevenire.
Prevenirea vaccinării nu a fost dezvoltată.
| " |
